质粒类型: | 哺乳动物表达载体 |
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启动子: | CMV |
克隆方法: | Gateway |
载体大小: | 8198 bp (查看载体序列) |
5' 测序引物及序列: | T7 Fwd:5'd[TAATACGACTCACTATAGGG]3' |
载体标签: | V5 Epitope Tag |
载体抗性: | Ampicillin (氨苄青霉素) |
筛选标记: | Blasticidin |
pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST实际上是一个双表达框载体,PGK启动子带一个EmGFP荧光标记基因,CMV启动子调控外源基因的表达。不过,外源基因插入CMV启动子后,只能用LR重组的方法实现,所以,外源基因需要先构建至Entry载体上,例如pENTR/D-TOPO等。
pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST空载上,CMV启动子后有ccdB表达框,所以此载体只能在DB3.1等专用的大肠杆菌中才能复制扩增,使用此载体时,请注意配套相应的DB3.1感受态。当外源基因成功插入,ccdB表达框将被置换掉,此时,重组质粒可以在DH5α等常规大肠杆菌中复制扩增。