质粒类型: | 大肠杆菌表达载体 |
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启动子: | T7 |
载体标签: | N-Trx |
酶识别位点: | P3C |
载体抗性: | Ampicillin |
5' 测序引物及序列: | 5 GCT AGT TAT TGC TCA GCG G 3 |
3' 测序引物及序列: | 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3' |
pET-Trx表达载体采用蛋白质工程改造的硫氧还蛋白即将其中两个氨基酸突变成His,使硫氧还蛋白在空间立体结构上形成三个组氨酸位点(His-patch),便于采用chelating sepharose亲和层析。该表达载体采用T7启动子和(His-patch)Thioredoxin融合表达,同时选用人鼻病毒14亚型3C蛋白酶专一性切割位点。硫氧还蛋白作为分子内伴侣可以帮助许多基因在E.coli胞内正确折叠如IL-3、IL-6、IL-11等。
Thioredoxinmut(His-patch) (E.coli)编码氨基酸序列如下(含多克隆位点):
MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAHWCGPCKMI
APILDEIADEYQGKLTVAKLNIDHNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKG
QLKEFLDANLAGSSMPDSLEVLFQGPAGSAEFSAS
133 AMINO ACIDS
MW 14KD
3 个His形成立体His-patch