质粒类型: | 酵母表达载体 |
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表达水平: | 高拷贝 |
启动子: | AOX1 |
克隆方法: | 多克隆位点,限制性内切酶 |
载体大小: | 8210 bp (查看载体序列) |
5' 测序引物及序列: | 5´ AOX1:5´-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3´; |
3' 测序引物及序列: | 3´ AOX1:5´-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3´ |
载体抗性: | Ampicillin (氨苄青霉素) |
筛选标记: | HIS4 |
pHIL-D2载体的详细信息如下:
• pHIL-D2载体大小8,210 bp,是融合表达载体。
• 载体构建过程中,可供使用的单一限制性内切酶位点为EcoR I.
• 胞内表达蛋白基因。
• 在载体构建过程中,需要在基因上添加起始密码子ATG。
• 毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。
• 为了将基因插入GS115或KM71的AOX区, 使用SacI限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+Mut+基因型,KM71中产生His+ MutS基因型)
•为了将基因插入GS115或KM71的His4区, 使用Sal I或者Stu I限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+ Mut+基因型,KM71中产生His+ MutS基因型) •将基因插入GS115的AOX1区域,需要使用Bgl II线性化质粒 (产生His+MutS基因型)。