psiCHECK-2 载体

psiCHECK™ -1 和psiCHECK™ -2 载体用于对RNA干扰(RNAi)的早期优化提供快速的定量方法。此载体可监测与报告基因融合的目的基因表达的变化。两种载体都应用海肾萤光素酶作为主要报告基因，目的基因被克隆至海肾萤光素酶翻译终止密码子下游的多克隆位点。由合成的siRNA 或体内表达的shRNA 引发的针对目的基因的RNAi过程，导致融合mRNA 的剪切和随后的降解。检测海肾萤光素酶活性的降低是一种监测RNAi 效果的简便方法。与其它的融合蛋白检测法( 如GFP 或flag 标签) 相比，海肾萤光素酶方法灵敏度更高、更方便、定量更快速。推荐psiCHECK™ -1 载体用于检测活细胞中的RNAi 效果。使用EnduRen™ 活细胞底物(Cat.# E6481) 检测海肾萤光素酶活性变化，这种底物可持续监测细胞内的海肾萤光素酶的发光。psiCHECK™ -2 载体含有第二个报告基因——萤火虫萤光素酶, 被设计用于终点裂解检测。其作用是使海肾萤光素酶表达归一化，可以得到强劲且可重复的数据。