DH10Bac 感受态细胞

DH10Bac感受态细胞是用来生产用于真核细胞蛋白表达的重组杆状病毒分子。

高效DH10Bac细胞含有父Bacmid的bMON14272和辅助质粒pMON7124。父Bacmid的包含一个小型F复制子，卡钠霉素抗性基因，attTn7重组位点和lacZα互补因子。辅助质粒包含的tnsABCD的区域,提供了转座蛋白，这些转座蛋白可以 供体质粒(Donor plasmid)上的小Tn7位点插入到父本Bacmid的重组目的位点。辅助质粒pMON7124包含有四环素抗性(Tetracycline).

DH10Bac感受态细胞本身含有卡那霉素和四环素抗性。在制作感受态细胞的时候，需要加入这两种抗生素，以防止DH10Bac中的质粒父本杆粒bMON14272（卡那霉素抗性）和辅助质粒pMON7124（四环素抗性）在细胞扩增过程中丢失，提高质粒转化后的基因转座效率。

携带Tn7转座元件的 供体质粒pFastBac，含有庆大霉素抗性基因，杆状病毒多角体启动子，一个多克隆位点区域和SV40的poolyadenylation信号。 重组的Bacmid分子通过将多克隆位点包含有基因编码序列的 供体质粒pFastBa质粒DH10Ba感受态细胞转化与在编码序列克隆到多个克隆网站（重组成功的质粒在选择性培养基平板上呈现为白色菌落）。然后可以将重组Bacmid进行挑菌，小量提取分离并且转染到昆虫细胞，从而进行感染重组杆状病毒颗粒生产。

高效DH10Ba感受态细胞的能够有效抵抗连接酶和连接酶缓冲液，同时可以容忍少量未稀释的连接反应。 φ80dlacZDM15标记可以利用Bacmid载体中的β-半乳糖苷酶基因α-互补使用含X-gal平板培养基的蓝白斑菌落筛选。

综上所述，DH10Bac感受态细胞本身含有卡那霉素和四环素抗性，而供体质粒pFastbac含有庆大霉素的抗性，所以在制备DH10Bac感受态细胞时需要在培养时添加卡那霉素和四环素，而在制备杆粒时需要使用卡那霉素，四环素，庆大霉素的三抗平板。